一、服务概况
嘉美生物SILAC-IP是将SILAC（细胞培养条件下稳定同位素标记技术）与免疫共沉淀（Co-IP）及质谱（MS）联用的蛋白互作分析技术。该技术被称为研究蛋白质相互作用和定量分析的“金标准”，能在天然细胞环境下高通量、高精度地鉴定和定量目标蛋白的互作蛋白网络。
与传统Co-IP相比，SILAC-IP的最大突破在于从源头引入质量差异，使实验组与对照组可在同一质谱分析中直接比较，显著降低假阳性率并实现互作蛋白的相对定量。
二、技术原理
SILAC-IP基于两大核心技术：
1.SILAC体内标记：在细胞培养基中添加稳定同位素标记的必需氨基酸（主要是赖氨酸和精氨酸的轻/重同位素型）。细胞连续传代5-6代后，新合成的蛋白质被同位素完全标记。
2.Co-IP富集与质谱定量：将轻标（对照组）和重标（实验组）细胞等量混合，用特异性抗体进行免疫共沉淀，富集目标蛋白及其互作复合物。随后通过LC-MS/MS质谱分析，根据轻/重肽段在一级质谱中的峰面积比进行相对定量。当某蛋白在实验组与对照组中的含量达到统计学差异时，即可判定该蛋白与诱饵蛋白存在特异性互作。
三、服务流程与技术路线
① SILAC细胞标记 ：分别用含轻/重同位素氨基酸的培养基培养细胞，连续传代5-6代，确保标记效率≥95%
② 细胞处理与裂解：根据实验设计进行转染、药物处理等；裂解细胞，提取总蛋白
③ 样本混合与Co-IP：将轻/重标记细胞等量混合，用特异性抗体进行免疫共沉淀，富集蛋白复合物
④ SDS-PAGE分离：将Co-IP产物进行SDS-PAGE电泳分离
⑤ 蛋白酶切：胶内酶切或溶液内酶解，提取肽段
⑥ LC-MS/MS质谱检测：采用高分辨质谱平台（如Orbitrap Fusion Lumos）结合Nano-LC进行检测
⑦ 数据分析：借助MaxQuant、Perseus等软件进行蛋白鉴定、定量及统计学分析
服务周期：收到样品后约2-6周可交付结果。
四、服务说明与样本要求
1.细胞样本：需提供可传代培养5次以上的活细胞；也可由嘉美生物代培养和标记
2.蛋白样本：如自行完成标记和处理，每个样品需保证≥300μg总蛋白
3.细胞类型：支持野生型、过表达或基因沉默细胞株
4.抗体要求：需提供经验证可用于IP的高特异性抗体；或由嘉美生物筛选推荐
5.运输条件：必须使用足量干冰运输，尽量选用快速邮寄方式，避免样品降解
6.备注：细胞标记效率是实验成败的核心，必须确保传代足够代数。若使用带标签（如Flag、HA）的过表达系统，抗体和磁珠若已化学偶联可避免后续抗体轻/重链干扰。
五、交付内容
1.详细实验报告：含实验步骤、质谱参数等
2.鉴定的蛋白质详细信息及质谱原始图片
3.质谱原始数据文件
4.生物信息学分析结果（GO功能注释、KEGG通路富集、互作网络构建等）
5.差异互作蛋白列表及定量统计结果
六、应用领域
1.蛋白互作网络解析：高通量鉴定特定蛋白的未知互作搭档，绘制互作网络图谱
2.信号通路研究：探索信号通路中关键蛋白的互作调控机制
3.药物靶点发现：筛选和创新药物靶点
4.疾病发病机制研究：解析疾病相关蛋白的相互作用及功能机制
5.翻译后修饰研究：定量分析磷酸化、乙酰化等修饰对蛋白互作的影响
七、常见问题（FAQ）
Q1：SILAC-IP与常规Co-IP相比有何核心优势？
A：常规Co-IP常受非特异性结合蛋白干扰，造成“假阳性”结果。SILAC-IP通过同位素标记，使实验组与对照组在同一个质谱分析中完成比较，可精准区分真实互作蛋白与非特异性背景蛋白。此外，常规Co-IP只能定性（有无互作），而SILAC-IP可提供互作蛋白的相对丰度信息。
Q2：SILAC标记需要多长时间？标记效率如何保证？
A：细胞在含轻/重同位素氨基酸的培养基中连续传代5-6代，通常需5-10天（取决于细胞倍增时间），标记效率可达95%以上。嘉美生物会在标记完成后进行标记效率检测。
Q3：哪些细胞适合做SILAC-IP？
A：SILAC是代谢标记技术，要求细胞能在体外连续传代培养。贴壁细胞和悬浮细胞均可，支持野生型、过表达或基因沉默细胞株。原代细胞因增殖能力有限，通常不适合。
Q4：SILAC-IP与常规免疫共沉淀在样本混合顺序上有何不同？
A：关键区别——常规Co-IP是分别做IP后再混合；SILAC-IP是先将轻/重标记细胞等量混合，再一起进行Co-IP。这种“先混合后IP”的策略可确保两组样本在后续所有操作步骤中经历完全相同的实验条件，最大限度降低实验系统误差。
Q5：如何避免抗体轻/重链对质谱检测的干扰？
A：若使用非化学偶联的抗体进行IP，洗脱液中会有大量抗体轻/重链，干扰质谱鉴定。解决方案：①将抗体与磁珠进行化学偶联，避免抗体脱落；②通过SDS-PAGE将抗体条带与目标蛋白分开，切取目标区域进行胶内酶切。
Q6：SILAC-IP的参考价格是多少？
A：SILAC-IP属于定制化深度服务，价格因细胞标记难度、质谱检测深度、数据分析复杂度而异。具体需根据实验方案咨询嘉美生物获取精准报价。
