一、服务概况

嘉美生物天狼星红染色（Sirius Red Staining）是一种用于检测胶原纤维分布和形态的经典组织学染色技术，广泛应用于病理学、药理学及生物医学研究领域。该技术通过特异性染色胶原纤维，帮助研究人员观察和分析组织纤维化的程度、修复过程以及疾病发展机制。与Masson染色相比，天狼星红染色最大的优势在于可在偏振光显微镜下区分Ⅰ型（橙红色）和Ⅲ型（绿色）胶原纤维，实现胶原亚型的分型与定量分析。该服务适用于肝脏、心脏、肾脏、肺脏、皮肤、血管、肿瘤等多种组织样本的石蜡切片和冰冻切片，覆盖了纤维化疾病研究的各个方向。

 

二、技术原理

1、天狼星红染色基于静电结合作用与偏振光双折射现象的双重机制。

2、在普通光学显微镜层面，天狼星红F3B是一种强酸性阴离子染料，在酸性（pH 2-3）环境中，染料分子带负电的磺酸基与胶原蛋白中带正电的碱性氨基酸侧链（如赖氨酸、羟脯氨酸）通过强静电作用紧密结合，形成稳定复合物，使胶原纤维呈现鲜红色，而背景及其他组织成分通常呈淡黄色或绿色。

3、在偏振光显微镜层面，天狼星红染色最显著的技术优势在于能增强胶原纤维的双折射效应，从而区分不同类型的胶原——Ⅰ型纤维排列紧密，呈橙红色或亮红色强双折射光；Ⅲ型纤维呈绿色弱双折射光；Ⅳ型呈淡黄色弱双折射光。

 

三、服务流程与技术路线

① 脱蜡至水：二甲苯脱蜡→梯度乙醇水化至蒸馏水，约40-50 min。

② 天狼星红染色：入饱和天狼星红染液（含苦味酸）染色，8-60 min（视胶原含量调整）。

③ 漂洗分化：0.5%醋酸快速漂洗去除未结合染料，约30 s。

④ 脱水：无水乙醇快速脱水（时间不宜过长），2-5 min。

⑤ 透明封片：二甲苯透明→中性树胶封固，约5-10 min。

⑥ 显微镜镜检：普通光学与偏振光分别观察，图像采集分析。

染色说明：染色时间需根据组织类型和胶原含量灵活调整：高胶原样本（如肝硬化组织）可延长至60分钟，低胶原样本（如肿瘤组织）可缩短至30分钟；常规操作中8-10分钟即可满足多数样本的染色需求。如需复染细胞核，可采用抗酸性更强的Weigert铁苏木素，不建议使用常规苏木素替代，因为天狼星红染液呈酸性会导致细胞核脱色。

 

四、服务说明与样本要求

1、固定组织：离体后0.5h内放入4%多聚甲醛或10%中性福尔马林固定24h以上，固定液体积≥20倍样本体积；也可使用Bouin’s固定液或Zenker固定液（含汞固定需充分脱汞）；常温运输送样；切勿过久固定，切勿冷冻结冰。

2、石蜡蜡块/切片：蜡块完整（带塑料框最佳），常温运输；切片厚度3-5μm（心肌或瘢痕组织建议6μm），常温干燥保存。

3、冰冻切片：厚度8-12μm（易脱片可降低至7-8μm），-20℃运输（夏季加冰袋），新鲜组织须干冰运输。

4、骨组织（未脱钙）：标本置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样；未脱钙骨切片需经天狼星红染色后进行偏振光观察。

5、细胞样本：不适用于培养细胞或细胞爬片等样本的染色。

 

五、交付内容

1、天狼星红染色成品玻片（石蜡切片/冰冻切片）

2、石蜡蜡块

3、高清数字图像（常规每张切片提供1-3张代表性图像）或全切片扫描图像

4、完整实验报告（含所用试剂、设备、方法步骤、结果判读等）

5、可选增值服务：胶原纤维面积百分比定量分析、Ⅰ型与Ⅲ型胶原比例分析、纤维化评分、病理学分析报告、图像AI辅助定量分析等

服务周期：7-10个工作日

 

六、应用领域

1、肝纤维化与肝硬化：评估病毒性肝炎、酒精性或非酒精性脂肪性肝炎导致的肝纤维化进程与分期；肝纤维化模型构建验证与药效评价。

2、心血管疾病：评估心肌梗死、心肌炎、心力衰竭等病变中的心肌间质纤维化与瘢痕形成程度。

3、肾脏疾病：观察糖尿病肾病、肾小球硬化等疾病中肾小球与肾间质的纤维化病变。

4、呼吸系统疾病：分析特发性肺纤维化、尘肺等疾病中肺泡间隔的胶原沉积。

5、肿瘤微环境研究：分析肿瘤基质中胶原含量和重塑模式，评估胶原排列对癌细胞侵袭和转移的影响。

6、骨组织与关节研究：用于未脱钙骨组织切片，评估骨胶原的分布、排列及骨组织修复过程中的胶原变化。

7、创伤修复与再生医学：评估伤口愈合过程中的胶原沉积和重塑情况，监测瘢痕组织形成。

 

七、常见问题（FAQ）

Q1：天狼星红染色的本质是什么？在偏振光下如何区分胶原类型？

A：天狼星红染色的本质是强酸性染料中的负电基团与胶原蛋白的碱性氨基酸侧链通过静电作用结合，形成稳定的复合物。在偏振光显微镜下，由于Ⅰ型和Ⅲ型胶原的分子聚合方式、纤维直径和空间排列存在差异，与染料结合后产生的干涉光颜色不同——Ⅰ型胶原呈橙黄色或亮红色强双折射光，Ⅲ型胶原呈绿色弱双折射光。两种胶原的比值变化可直接反映组织纤维化的病理进程。

Q2：天狼星红染色与Masson染色有何区别？

A：Masson三色染色能将胶原纤维染成蓝色或绿色，肌纤维染成红色，主要用于观察胶原纤维的总体分布；而天狼星红染色的核心优势在于可在偏振光显微镜下区分Ⅰ型和Ⅲ型胶原，实现胶原亚型的分型与定量分析。免疫组化虽也能区分不同类型胶原，但抗体昂贵、操作费时；相比之下，天狼星红染色试剂便宜、操作简单、稳定可靠。

Q3：如何解决染色后背景偏红、胶原纤维着色不够鲜明的问题？

A：背景偏红的原因可能是染液浓度过高、染色时间过长或分化不足，可通过适当稀释染液、延长0.5%醋酸分色时间来解决。胶原纤维着色浅可能由于染色时间不足或固定液选择不当——含酸的固定液（如Bouin’s液）可使胶原流失；建议延长天狼星红染色至30-60分钟。

Q4：石蜡切片和冰冻切片在染色要求上有何不同？

A：石蜡切片必须经过彻底的脱蜡至水处理，脱水时使用新鲜脱水剂并快速进行，以降低染色褪色风险。冰冻切片无需脱蜡，但需延长固定时间以增加组织附着性，两者染色步骤基本一致。

Q5：复染细胞核应采用什么苏木素？普通苏木素可以吗？

A：如无细胞核染色需求，可不进行铁苏木素染色，直接进行天狼星红染色。如需复染细胞核，建议使用Weigert铁苏木素，不建议使用常规苏木素（如Mayer苏木素），因为铁苏木素为抗酸型苏木素，能更好地耐受天狼星红染色液的酸性环境，有效减少染色过程中细胞核的脱色现象。

Q6：切片厚度对偏振光观察有什么影响？

A：为使偏振光下显示清晰，切片厚度以6-7μm为宜。石蜡切片一般为3-5μm（心肌或瘢痕组织建议6μm），冰冻切片建议8-12μm。厚度过大会削弱光线穿透效果，厚度过小则胶原双折光效应不够明显。

Q7：用于PAS或HE染色的样本固定液是否也适用于天狼星红？

A：一般无特殊要求，常用4%多聚甲醛或10%中性福尔马林均可；Bouin‘s固定液与Zenker固定液也可选用，但使用含汞固定液时需要经过充分的脱汞处理。不推荐使用塑料包埋（甲基丙烯酸酯），会显著降低染料渗透，导致无法获得充分染色效果。

Q8：染色后切片如何保存？

A：完成脱水透明并用中性树胶密封封固后，应在显微镜下尽快观察及图像采集。观察纤维的双折光现象要及时进行，否则随着时间的推移，纤维的双折光现象会减弱甚至消失造成假阴性。长期保存时需室温避光、防潮存放。

  
                                 天狼星红染色                                                                   天狼星红染色                                                                     天狼星红染色

  
                           天狼星红染色偏振光                                                               天狼星红染色偏振光                                                         天狼星红染色偏振光