一、服务概况

嘉美生物苏丹黑B（Sudan Black B，SBB）染色是一种脂溶性重氮染料染色技术，主要用于显示组织细胞中的中性脂肪、磷脂和脂蛋白。该染料能以棕黑至蓝黑色使脂类着色，尤其对磷脂的亲和力更具特异性，不仅能显示大的脂肪滴，还可显示微细结构中的隐性脂类。在临床最常用于急性白血病的鉴别诊断，可将脂质丰富的前体细胞与缺乏脂质的细胞区分开来，同时也是髓鞘染色和评估脱髓鞘疾病的经典方法之一。

二、技术原理

苏丹黑B属于脂溶性偶氮染料（重氮染料），其染色基于物理溶解原理——染料在脂质中的溶解度大于其在有机溶剂中的溶解度。当切片置于染液中时，染料离开酒精溶液而溶于组织内的脂滴中，使脂类着色的同时不发生化学结合。该染料在596–605 nm处有最大吸收，浆中脂肪、磷脂等脂质多呈棕黑或深黑色。

三、服务流程与技术路线

1、冰冻组织切片：4%多聚甲醛固定→冰冻切片（6–10 μm）→70%乙醇浸洗→苏丹黑B染色液染色→50–70%乙醇分色→流水冲洗→核固红/苏木精复染→甘油明胶封片，总染色时间10–35 min。

2、细胞涂片/血涂片：干燥涂片浸于10%甲醛盐水10 min→流水冲洗→苏丹黑B染液染色→70%乙醇脱色3 min→瑞氏染液复染20–30 min，总染色时间1–12 h。

3、结果判读：中性脂肪呈棕黑至黑色，磷脂呈蓝黑色，细胞核（经核固红复染）呈红色。

四、服务说明与样本要求

1、样本类型：必用冰冻切片或细胞涂片/血涂片，不宜使用石蜡切片（有机溶剂会溶解脂质）

2、固定要求：固定液可采用10%福尔马林，但不能使用含乙醇的固定液（乙醇会溶解脂质）

3、组织块固定：离体后0.5 h内放入4%多聚甲醛或10%中性福尔马林固定12–24 h，常温运输

4、冰冻切片：厚度6–10 μm，-20℃运输（夏季加冰袋），干冰运输新鲜组织

5、细胞爬片/涂片：4%多聚甲醛固定15 min，PBS覆盖，4℃运输和保存

特殊说明：含高脂肪量组织（如脂肪瘤）冰冻切片温度需调节至-30℃

五、交付内容

1、苏丹黑B染色成品玻片（冰冻切片/细胞涂片）

2、高清数字图像或全切片扫描图像

3、完整实验报告（含试剂信息、方法步骤、结果判读）

4、可选增值服务：脂滴形态定量分析、髓鞘完整性评估、白血病细胞阳性率统计报告等

服务周期：7-10个工作日。

六、应用领域

1、急性白血病鉴别诊断：髓系原粒细胞和早幼粒细胞呈阳性反应（黑色颗粒）；急性淋巴细胞白血病中淋巴细胞均呈阴性，是鉴别髓系白血病与淋系白血病的重要细胞化学染色方法

2、髓鞘染色与脱髓鞘疾病评估：可在冰冻切片中清晰显示髓鞘呈黑色，评估脱髓鞘疾病（如多发性硬化症）中的髓鞘修复和再髓鞘化效果，比树脂包埋半薄切片更快、更易于操作且无毒

3、脂肪变性与脂肪代谢研究：显示肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性，辅助脂肪组织肿瘤的鉴别诊断：脂肪瘤、脂肪肉瘤、卵泡膜瘤等呈阳性，肾透明细胞癌呈阴性

4、组织/细胞脂类染色：显示神经髓鞘、白细胞颗粒、高尔基体、脂褐素等胞内脂类成分

七、常见问题（FAQ）

Q1：苏丹黑B染色为什么要用冰冻切片，不能用石蜡切片？

A：常规石蜡包埋过程中的梯度乙醇脱水和二甲苯透明步骤会将脂质完全溶解，导致无法显示脂滴。因此，苏丹黑B染色必须在冰冻切片上进行。对于固定后的组织块，可经4%多聚甲醛固定后制作冰冻切片。

Q2：固定液为什么不能含有乙醇？

A：乙醇是脂类溶剂，会溶解组织中的中性脂肪和磷脂，导致脂质流失出现假阴性结果。如需固定，应使用10%福尔马林或4%多聚甲醛，而禁用75%乙醇等含乙醇固定液。

Q3：苏丹黑B染液如何配制和保存？为什么容易产生沉淀？

A：传统方法将苏丹黑B溶于70%–100%乙醇中。由于溶剂易挥发，苏丹黑B容易析出形成沉淀，导致染色不均匀、背景不干净。染液应密封保存、避免与流动空气接触，如发生沉淀且颜色由蓝色变为褐色则不宜再用。

Q4：苏丹黑B染色与过氧化物酶（POX）染色有何关系？如何用于白血病鉴别？

A：苏丹黑B染色与髓过氧化物酶（MPO）阳性结果基本一致，但SBB的敏感性更高。髓系细胞（粒细胞、早幼粒细胞、单核细胞）阳性，淋巴细胞阴性，是鉴别急性白血病类型最重要的细胞化学染色方法。

Q5：苏丹黑B染色在髓鞘修复研究中有何优势？

A：苏丹黑B染色可在冰冻切片上可靠显示髓鞘修复，与树脂包埋半薄切片结果相当，但更快、更易操作、毒性更低、成本更低，因此可用于快速筛选和评估脱髓鞘疾病中的再髓鞘化疗法。

Q6：细胞核复染需要多长时间？如何选择复染剂？

A：可选择核固红（5–10 min）或苏木精（1–3 min）进行复染，使细胞核与脂滴形成清晰对比。复染时间过长会导致细胞核过深掩蔽脂滴信号，镜下观察如染色过深可用酸性分化液快速分化数秒。

Q7：苏丹黑B染色如何避免背景非特异性着色？

A：染色过程中必须防止染料沉淀：切片入染液时应密封，勿与流动空气接触，避免溶剂挥发导致染料沉淀析出。染色完成后需用70%乙醇充分分色（30 s–3 min）至背景清晰。

Q8：结果判读时如何判断染色是否正确？

A：阳性产物为黑色或蓝黑色颗粒定位于胞浆中。粒细胞均可见阳性颗粒，嗜酸粒细胞呈泡状阳性，单核细胞大多呈弱阳性且颗粒细小散在；淋巴细胞、幼红细胞、巨核细胞和血小板均呈阴性反应。