一、服务概况

嘉美生物阿利新蓝染色（Alcian Blue Staining, AB Staining）是显示酸性黏液物质最特异的染色技术。该染料属于阳离子染料，能与酸性黏液物质中的阴离子基团结合，使目标成分呈现鲜亮的蓝色。阿利新蓝常用于骨组织软骨观察、早幼粒细胞及巨核细胞染色等方面，在肿瘤鉴别、骨关节炎及血液病诊断等多个领域均有重要价值。该服务适用于石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片等多种样本类型。

二、技术原理

阿利新蓝是一种类铜钛花青共轭染料，分子中带正电荷的盐键能与酸性黏液物质中带负电荷的酸性基团（如羧基和硫酸根）结合，形成不溶性复合物，使酸性黏蛋白、蛋白多糖和透明质酸等成分呈现蓝色。

阿利新蓝染色最关键的技术参数是染液pH值，不同pH值下染色特异性和范围完全不同，可根据实验目的进行选择：

1、pH 2.5 羧酸化酸性黏液：唾液黏蛋白、蛋白多糖和透明质酸着色良好；显示硫酸化黏液物质，但效果不佳，中性黏蛋白不着色。

2、pH 1.0 硫酸化强酸性黏液：可染色硫酸黏蛋白等酸性黏蛋白，羧基(COOH)不着色，中性黏蛋白不着色。

三、服务流程与技术路线

① 脱蜡至水：二甲苯脱蜡→梯度乙醇水化至蒸馏水。

② 酸化处理：阿利新蓝酸化液浸泡 3 min。

③ 染色：阿利新蓝染液（pH 2.5）染色 30 min。

④ 流水冲洗：流水冲洗 5 min。

⑤ 复染：核固红复染 5-10 min，使细胞核呈现红色。

⑥ 脱水封片：流水冲洗 1 min→脱水→透明→中性树胶封固。

备注：染色时间需根据组织类型和切片厚度灵活调整。阿利新蓝染料的染色特点是颜色浓、牢固，染色时间延长一般不会过染。

四、服务说明与样本要求

1、固定组织：离体后 0.5h 内放入 10% 中性福尔马林或 4% 多聚甲醛中固定 12–24h；固定液体积至少为组织的 10–20 倍；大标本需切开固定以确保内部充分固定；常温运输，切勿冷冻结冰

2、石蜡蜡块/切片：蜡块完整（带塑料框最佳），常温运输；切片厚度 3–5 μm，常温干燥保存

3、冰冻切片：-20℃ 运输（夏季加冰袋），新鲜组织须干冰运输

4、细胞爬片：4% 多聚甲醛固定 15 min，PBS 覆盖，4℃ 运输和保存

5、整体胚胎/器官：4% 多聚甲醛固定 24h，蔗糖脱水，OCT 包埋后整体染色

五、交付内容

1、阿利新蓝染色成品玻片（石蜡/冰冻切片）

2、石蜡蜡块

3、高清数字图像或全切片扫描图像（常规每张切片提供 1–3 张代表性图像）

4、完整实验报告（含试剂信息、方法步骤、结果判读）

5、可选增值服务：病理学分析报告、酸性黏液面积半定量分析、软骨损伤程度评估、骨关节炎评分（OARSI 系统）、图像定量分析报告等

服务周期：7-10个工作日。

六、应用领域

1、骨与软骨病理：显示软骨形态、潮线等结构，评估骨关节炎软骨损伤程度。

2、血液病诊断：识别早幼粒细胞（呈强阳性反应）和巨核细胞（阳性反应），辅助急性早幼粒细胞白血病（APL）诊断。

3、肿瘤病理：鉴别黏液性上皮肿瘤中酸性黏蛋白，区分羧基黏液和硫酸化黏液物质。

4、消化系统病理：评估 Barrett 食管杯状细胞化生、结直肠癌黏蛋白性质分类。

5、肺部疾病：检测肺泡上皮来源的酸性黏液，鉴别支气管肺泡癌与其他肺腺癌亚型。

6、呼吸系统真菌感染：新型隐球菌荚膜含酸性黏多糖，在阿利新蓝染色中呈蓝色阳性。

7、前列腺腺癌鉴别：酸性黏蛋白在前列腺癌中呈阳性，在结节性增生中呈阴性，辅助鉴别诊断。

8、基础科学研究：评估胚胎发育过程中软骨形成和黏液物质的动态表达变化。

七、常见问题（FAQ）

Q1：阿利新蓝染色为什么要严格控制染液的 pH 值？不同 pH 值对应何种黏液类型？

A：pH 是阿利新蓝染色特异性的核心参数。pH 2.5 时显示羧基（-COOH）电离带负电荷，可与染料阳离子结合，主要着色唾液酸修饰的酸性黏液（含羧基）；pH 1.0 时羧基不解离，只有硫酸基（-OSO₃H）保持电离，只能结合强硫酸化黏液物质。这一 pH 依赖性差异可用于区分不同化学性质的黏液成分。

Q2：阿利新蓝染色应该先做还是后做（与 HE 或 PAS 联合染色时的顺序问题）？

A：联合染色时，应先进行阿利新蓝染色，再进行其他染色（如 PAS 或 HE）。若先做 PAS（需用过碘酸氧化），会破坏糖蛋白和黏蛋白的糖链结构，导致后期阿利新蓝无法与酸性基团结合。严格执行“先 AB 后 PAS”的染色顺序是保证染色准确性的关键。

Q3：染色后出现整体颜色过深、背景不清或非特异性着色怎么办？

A：背景过深通常是由于染色后水洗不充分所致。染色完成后应充分流水冲洗（不少于 5 min），彻底去除未结合的染料。若仍有过染，可轻微蘸入碱性乙醇短暂分化褪色；亦可在 3% 醋酸中快速漂洗 1–2 次去除多余染料。

Q4：细胞核复染核固红的时间为何不宜过长？

A：核固红复染时间越长，阿利新蓝的着色越暗，黏液物质也可能凝集成团，干扰对蓝色阳性结构的观察判断。若复染确实影响到染色结果判读，可以选择不复染核固红（此时背景和细胞核均无色），仅依靠阿利新蓝的蓝色信号进行分析。

Q5：骨/软骨组织的样本送检前需要进行脱钙处理吗？

A：需要进行脱钙处理。含钙标本（骨组织、牙齿等）在做常规石蜡包埋切片时须先行脱钙，否则钙盐会阻碍刀片切割、损伤切片刀，且影响包埋和染料渗透。推荐使用 EDTA（乙二胺四乙酸）或温和脱钙液（0.5 M EDTA 脱钙，脱钙时间一般 2–4 周，具体视标本大小和矿化程度而定）。

Q6：石蜡切片和冰冻切片在阿利新蓝染色处理上有什么不同？

A：主要在前处理步骤上的差异。石蜡切片必须经过彻底脱蜡（二甲苯浸泡）和梯度乙醇水化处理，恢复组织亲水性和染料渗透性；冰冻切片无需脱蜡，可直接染色。两种切片的染色和复染步骤基本一致，统一按照标准流程操作即可。

Q7：阿利新蓝染色可用于哪些定量分析？

A：阿利新蓝染色后的切片可与数字图像分析软件（如 ImageJ、QuPath）结合进行图像分析，可计算：（1）酸性黏蛋白阳性区域占总面积的比例；（2）软骨基质中蛋白多糖的含量（软骨红色明暗程度可反映唾液酸化黏蛋白的丰富程度）；（3）不同类型酸性黏液物质的面积比例等。这些数据可用于骨关节炎、肿瘤、炎症性肠病等研究中酸性黏液变化的定量评估。

Q8：组织固定液选用 10% 中性福尔马林还是 95% 乙醇？

A：用途不同选择不同。常规组织病理可选用 10% 中性福尔马林进行通用固定并兼顾阿利新蓝染色与 HE 染色、PAS 染色的综合性研究。若完全专注于阿利新蓝染色（尤其是骨组织），则必须使用 95% 乙醇固定，可更好地保留酸性黏液物质的可染性（因乙醇不引起醛基交联）。

Q9：固定时间过长或固定液不足对染色结果有何影响？

A：固定不足会导致组织自溶，黏液物质降解失去酸性基团，染色结果显著减弱甚至呈阴性；固定过久（超过 48–72 h）则过度交联抗原表位，染料无法进入组织中与酸性基团结合，同样导致染色效果差。固定液体积至少需为组织的 10 倍以上。

Q10：染色后切片如何保存？

A：脱水透明并用中性树胶密封封固后，应尽快在显微镜下观察和图像采集。长期保存时需于 4℃ 或室温下避光、防潮存放，避免重物压片。注意避免高湿度和紫外线照射，以防止核固红染色成分褪色。建议在封片后一周内完成图像采集和数据定量分析。