一、服务概况

嘉美生物AB-PAS染色（Alcian Blue-Periodic Acid-Schiff staining）是联合阿利新蓝和过碘酸-雪夫反应的双重染色技术，广泛应用于肠道化生、黏液腺癌分型及真菌感染鉴别等领域。相比传统的PAS染色，AB-PAS不仅能检测糖原和多糖类物质，还能进一步区分酸性黏蛋白和中性黏蛋白，使切片呈现从红色到蓝色不同层次的显色效果。可针对石蜡切片、冰冻切片等多种样本类型提供检测及临床病理诊断支持。

二、技术原理

AB-PAS染色分两个阶段同时进行：

1、阿利新蓝染色（AB阶段） ：阿利新蓝是一种阳离子染料，能够与酸性黏蛋白中的阴离子基团（如羧基和硫酸根）形成不溶性复合物，将酸性黏蛋白物质染为蓝色。本服务AB染液的pH值严格控制在2.5，主要用于唾液黏蛋白和硫黏蛋白的显示。

2、PAS反应（PAS阶段） ：过碘酸将糖类物质相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，无色品红试剂（Schiff试剂）与醛基反应后生成紫红色化合物，用于显示糖原和中性黏蛋白。

3、两种染色联合后，可根据最终颜色区分黏液物质类型：酸性物质仅被AB染显蓝色；中性物质仅被PAS染显紫红色；混合性黏液物质则呈现蓝紫色或深浅不同的紫色。

三、服务流程与技术路线

① 脱蜡至水：二甲苯脱蜡→梯度乙醇水化至蒸馏水，约30-40 min。

② 阿利新蓝染色：入阿利新蓝染液（pH 2.5），8-30 min（组织类型不同有调整）。

③ 蒸馏水洗涤：蒸馏水洗3次，3-6 min。

④ 过碘酸氧化：入过碘酸溶液氧化，5-15 min

⑤ Schiff试剂染色：滴加雪夫试剂避光浸染，20-30 min。

⑥ 流水冲洗：流水充分冲洗（去除游离醛基），5-10 min。

⑦ 苏木精复染：染细胞核，1-5 min。

⑧ 脱水封片：梯度乙醇脱水→二甲苯透明→中性树胶封固，约15 min。

四、服务说明与样本要求

1、新鲜组织：离体后放入10%中性福尔马林或4%多聚甲醛固定液中固定24h以上，固定液体积至少为标本的20倍；常温运输送样；切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。

2、石蜡蜡块/切片：蜡块完整（带塑料框最佳），常温运输；切片厚度3-5 μm，常温干燥保存。

3、冰冻切片：-20℃运输保存（夏季加冰袋），新鲜组织须干冰运输。

4、细胞爬片/涂片：4%多聚甲醛固定15 min，PBS覆盖，4℃运输。

5、整体胚胎/器官：4%多聚甲醛固定24h后蔗糖脱水，OCT包埋后整体染色。

五、交付内容

1、AB-PAS染色成品玻片（石蜡/冰冻切片）

2、石蜡蜡块

3、高清数字图像或全切片扫描图像

4、处方判断读与实验报告（含所用试剂、仪器设备、方法步骤等详细说明）

5、可选增值服务：病理学分析报告、黏液化学表型定量分析、肠上皮化生分类报告等。

六、应用领域

1、消化系统病理：胃黏膜肠上皮化生的分类——完整杯状细胞显示为蓝色（酸性黏蛋白）；胃型腺上皮显示为紫红色（中性黏蛋白）。

2、黏液腺癌分型：区分肠型（AB+蓝色）与胃型（PAS+紫红）腺癌，提供黏液化学表型的病理诊断依据。

3、胃癌鉴别诊断：胃印戒细胞癌细胞内黏液呈蓝色或紫红色，辅助分型与预后判断。

4、肺部肿瘤诊断：肺黏液表皮样癌肿瘤细胞胞质呈现紫红色或蓝色的液滴状，显示黏液及糖原成分。

5、真菌感染检测：曲菌、隐球菌、放线菌等真菌的菌丝和菌体均呈阳性紫红色，辅助真菌感染类型鉴定及诊断。

6、肾脏病理：膜性肾病中清晰显示增厚的基底膜，辅助肾小球疾病的病理评估。

7、胚胎与发育生物学：观察胚胎发育过程中上皮组织糖蛋白和酸性黏蛋白的动态变化。

8、糖原贮积疾病：评估肝细胞、心肌细胞内糖原累积程度以及黏蛋白分布的变化。

七、常见问题（FAQ）

Q1：AB-PAS染色与单独的PAS染色相比有何优势？

A：PAS染色只能显示糖原和中性黏蛋白，无法区分酸性黏蛋白的类型。AB-PAS染色通过双染技术同步显示酸性成分（蓝色）和中性成分（紫红色）。AB-PAS染色阴性，可明确断定该物质不是黏蛋白；如果AB-PAS染色后呈混合性蓝紫色或深浅不同的紫色，则可判定细胞或组织内既含中性黏蛋白又含酸性黏蛋白物质。

Q2：阿利新蓝染色为何必须控制pH值在2.5？

A：pH值是阿利新蓝染色特异性的关键——在pH 2.5时，该染料主要与黏蛋白中的羧基结合，显示酸性黏蛋白。若pH偏离2.5，会导致AB染色减弱甚至完全不着色。本服务严格控制AB染液pH值为2.5，确保染色结果的准确性与可重复性。

Q3：为什么必须遵循“先AB后PAS”的染色顺序？

A：AB-PAS联合染色时必须严格按照先行AB染色后行PAS染色的步骤，不能将染色顺序随意打乱。如果先做PAS后再做AB染色，容易导致中性、酸性和混合性黏液物质混染，或者细胞核不着色等异常染色结果。

Q4：染色后出现混合颜色不清、红色和蓝色难以分辨怎么办？

A：混合颜色不清的原因通常是染色顺序错误（如先做PAS再做AB），或两种染色之间洗涤不彻底。解决方法是严格执行“先AB后PAS”的染色顺序，并在AB染色和PAS染色之间对切片进行充分的水洗（3次，每次1-2 min），清除残留的阿利新蓝染液。

Q5：不同的组织类型适用的染色时间一样吗？

A：不一样。AB染色和PAS染色的时间都需要根据组织类型和切片厚度进行调整。一般推荐：胃肠黏膜AB染色20 min、PAS染色10 min；呼吸道AB染色30 min、PAS染色15 min；肿瘤组织AB染色需延长至40 min、PAS染色20 min，以确保染色充分、展示所有黏液物质成分。

Q6：固定液中固定的时间过长有什么影响？

A：样本固定液中时间超过标准范围（24-48h）会导致组织过度交联抗原表位，导致AB-PAS染色信号减弱或消失，影响病理诊断结果。建议新鲜组织4%多聚甲醛固定24h左右后尽快送检，否则需更换新鲜固定液避免过度硬化。

Q7：如何确保PAS背景干净、无假阳性染色？

A：PAS背景偏深可能有三个原因：① Schiff试剂染色后流水冲洗不彻底；② 过碘酸氧化时间过长；③ 福尔马林固定的组织未完成对游离醛基的彻底清洗。解决方法是：施予氧化步骤严格控制在建议时间范围内（不超过15 min）；Schiff染色后用流水冲洗至少5-10 min至彻底去除所有未结合的染料；如固定液为含醛基的福尔马林，脱蜡至水后充分洗脱残留醛基。

Q8：为什么在某些AB-PAS染色后需要加做淀粉酶消化试验？

A：将AB-PAS染色阳性的切片用淀粉酶/糖原酶预先消化30-60 min，可有效去除糖原造成的PAS阳性结果。《淀粉酶消化试验》用于辅助区分糖原（可被消化而消失）和黏液物质（不被消化保留），确保阳性信号的专一性，避免将糖原沉积误诊为黏液分泌。

Q9：AB-PAS染色在胃黏膜反应性增生与异型增生鉴别中的价值是什么？

A：AB-PAS染色在胃黏膜反应性增生中的阳性率约为87.3%（55/63），表现为异型增生腺体细胞质内AB-PAS阳性黏蛋白颗粒明显缺失，两组间差异有统计学意义（P<0.01）。AB-PAS染色与Ki-67免疫组织化学标记联合应用，可为胃黏膜反应性增生及异型增生的鉴别诊断提供可靠的病理学依据。

Q10：AB-PAS染色后如何保存封片？

A：完成脱水透明并用中性树胶密封固封后，应在显微镜下尽快观察与摄影记录。长期保存时需于4℃或室温避光、防潮保存，避免重物压片。注意避免高湿度和紫外线照射以防止Schiff染色成分褪色。建议在封片后一周内完成图像采集和数据定量分析。