一、服务概况

嘉美生物EVG染色（Elastic-Van Gieson染色）又称弹力纤维Verhoeff's Van Gieson染色，是病理组织学中用于显示弹性纤维与胶原纤维差异的经典特殊染色技术。弹性纤维广泛分布于身体各处，特别在动脉壁、肺泡壁和皮肤中最为丰富。EVG染色能够清晰地分辨出弹性纤维、胶原纤维与背景结构，使弹性纤维呈黑色或蓝黑色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色，广泛应用于血管病变、肺部疾病、皮肤组织与生物材料的形态学评估中。该服务可针对石蜡切片和冰冻切片等多种样本类型进行检测。

 

二、技术原理

EVG染色原理基于弹性纤维对铁苏木精具有更强的吸附亲和力。组织被含有三氯化铁和碘的苏木精染色后，再用过量的媒染剂三氯化铁中断组织与染料的结合，分化液中大量的媒染剂可将染料吸引并从组织中清除，但由于弹性纤维对铁苏木精的吸附力最强，染料能比其他组织保留更久而达到染色的效果。总体上，Verhoeff's染液使弹性纤维着色呈黑色或蓝黑色，胶原纤维中的成分则与染料分子大小不同使得结合较松散，再经Van Gieson染液复染后呈红色。

 

三、服务流程与技术路线

① 样本接收：接收固定组织、石蜡切片、冰冻切片。

② 脱蜡至水：石蜡切片需经二甲苯脱蜡→梯度乙醇水化。

③ EVG染色：Verhoeff's染液室温染色1–3 min，至颜色呈深黑色。

④ 分化：2%三氯化铁溶液分化10–20 s，显微镜下控制分化程度至弹性纤维黑色、背景灰色。

⑤ VG复染：Van Gieson's染液复染10–15 s。

⑥ 脱水封片：无水乙醇脱水→二甲苯透明→中性树胶封固。

⑦ 显微镜镜检：观察并记录结果。

备注：Verhoeff's染液和Van Gieson's染液须使用前新鲜配制，用不完请弃掉。分化步骤须在显微镜下严格监控，避免分化过度导致短纤维被洗脱。

 

四、服务说明与样本要求

1、固定组织：约1×1×0.5 cm，4%多聚甲醛、Bouin氏液或Zenker氏液固定24 h以上；固定液体积至少为标本的20倍；常温运输；切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。

2、石蜡切片：切片厚度4–5 μm，常温干燥保存与运输。

3、冰冻切片：–20℃运输保存，夏季需加冰袋；如需自发荧光，须用锡箔纸避光包装。

4、细胞涂片/爬片：4%多聚甲醛固定15 min，PBS覆盖，4℃运输；外周血/骨髓涂片需新鲜未染色涂片。

5、特殊样本：骨组织等钙化组织需预先脱钙处理后方可进行EVG染色。

 

五、交付内容

1、EVG染色成品玻片（石蜡切片和/或冰冻切片）

2、石蜡蜡块

3、高清数字图像或全切片扫描图像

4、完整实验报告（含试剂信息、方法步骤、染色结果判读）

5、可选增值服务：弹力纤维与胶原纤维面积比例定量分析、血管侵犯程度评估报告、纤维化程度分级评估、病理学诊断分析报告等。

服务周期：7–10个工作日。

 

六、应用领域

1、心血管病理：区别正常动脉与静脉；评估动脉粥样硬化中弹性纤维的变薄和缺失；观察高血压导致的主动脉弹性纤维增生。

2、肺部疾病诊断：非小细胞肺癌胸膜侵犯程度判断（弹力纤维层是否被破坏）；肺气肿组织中弹性组织萎缩评估；COPD患者脏层胸膜厚度及弹性纤维比例分析。

3、皮肤病理：观察皮肤弹性纤维的裂隙与破碎；辅助诊断弹力纤维痣、环状肉芽肿、硬度病；鉴别促纤维增生性黑色素瘤与手术疤痕。

4、肿瘤诊断：检测肿瘤血管内浸润；辅助弹力纤维瘤诊断（瘤样病变内有大量弹力纤维增生）。

5、结直肠癌病理分期：检测静脉侵犯（静脉壁含有弹性纤维层，淋巴管则不含），辅助判断结直肠癌的精确分期。

6、心内膜疾病诊断：显示增厚的心内膜内弹力纤维和胶原纤维，辅助诊断心内膜弹力纤维增生症。

7、脱发鉴别诊断：在水平切片中显示毛囊周围弹性纤维网络是否存在缺损，鉴别不同病因的瘢痕性脱发。

8、生物材料与组织工程：评估支架材料植入后弹性纤维再生情况、血管组织工程中弹性基质重构检测。

 

七、常见问题（FAQ）

Q1：为什么EVG染色在HE染色之外有不可替代的价值？

A：在常规HE染色中，弹力纤维镜下为亮粉色，与胶原纤维颜色难以分辨，不易识别；EVG染色能将弹性纤维染成蓝黑色而胶原纤维染成红色，从而清晰显示弹力纤维的分布、形态和数量变化，这对于评估肺、血管、皮肤等富含弹性纤维组织中的病理改变（如增生、断裂、崩解）具有决定性临床意义。

Q2：EVG染色的核心操作难点是什么？

A：EVG染色的技术难点在于分化步骤。分化液中的媒染剂能将染料从组织中逐步清除，弹性纤维因吸附力最强而能保留染料时间最长。分化不足会导致背景过深，不满足诊断要求；分化过度则让弹性纤维（尤其是短支纤维）被洗脱，造成假阴性结果。因此须在显微镜下每分化数下就进行镜检判断，若分化过度可重新加染后再镜检分化。

Q3：组织固定不当会对EVG染色结果产生哪些影响？

A：EVG染色的成败与组织处理质量密切相关。固定不足会导致组织自溶、弹性纤维扭曲；固定过度（超过72 h）则导致抗原交联过度、染料不易渗入，染色效果减弱。推荐使用4%多聚甲醛、Bouin氏液或Zenker氏液固定，固定液体积至少为标本的20倍，固定24 h以上但不宜过久。

Q4：分化过度如何处理？

A：分化过度（镜下弹性纤维变淡、消失）时，可将切片重新放回Verhoeff's染液中再染1–3 min后重新进行分化。分化时间应当每次增加2–5 s分段进行，频繁镜检确认效果，并确保分化液配制比例正确、试剂无污染。

Q5：Van Gieson复染时间过长会有什么后果？

A：Van Gieson染液复染时间过长会使红色染料过度吸附在背景和弹性纤维上，掩盖弹性纤维的黑色结果，导致镜下红色过重，弹性纤维识别不清。建议复染时间控制在10–15 s，并在无水乙醇中进行短暂分化和脱水处理，以保持弹性纤维与胶原纤维的对比清晰。

Q6：EVG染色适用于哪些样本类型？可接受冰冻切片染色吗？

A：EVG染色可针对组织块、石蜡切片、冰冻切片以及涂片/细胞爬片进行染色。石蜡切片脱蜡需彻底以避免染色不均；冰冻切片送样时应于-20℃运输，避免反复冻融导致弹性纤维破裂。细胞涂片固定良好后也可EVG染色，便于观察弹性纤维在细胞外基质中的分布。

Q7：如何降低EVG染色中的背景背景杂质和不均匀染色？

A：染色不均匀往往源于脱蜡不彻底、酒精浓度梯度操作过快或是分化液洗涤不均匀。建议石蜡切片时严格按二甲苯全脱蜡后再经过梯度乙醇200分步水化；分化液洗涤时用整缸缓慢换液以确保每个切片染液受量一致，玻片不干燥；如试剂配好后时间过久，应新鲜配制并使用。

Q8：EVG染色对弹性纤维的显示可以用于哪些定量分析？

A：EVG染色后的切片可与ImageJ软件或定量病理学分析软件结合进行图像分析，可计算（1）弹性纤维占组织总面积的比例；（2）弹性纤维的直径、长度和曲率；（3）组织区域内的弹性纤维层厚度；（4）胶原纤维与弹性纤维的面积比例等。这些数据可用于评价动脉粥样硬化、肺气肿、肝硬化、心血管病变、皮肤老化等多种疾病模型的病理变化程度。

  

  
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