一、服务概况

嘉美生物PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）又称过碘酸-雪夫染色或糖原染色，是组织学中应用最广泛的特殊染色方法之一。由McManus于1946年创立，该技术基于过碘酸氧化与无色品红结合的原理，精准定位且能显著增强对比度，被公认为显示组织细胞内糖类物质的最经典方法。该染色技术不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质、基底膜、真菌等，在多领域为病理诊断提供直观有力的形态学依据。

 

二、技术原理

1、PAS染色反应分两个阶段：过碘酸（Periodic acid）将细胞内糖类物质相邻两个碳上的乙二醇基（—CHOH—CHOH—）氧化为二醛基（—CHO—CHO）；无色碱性品红-Schiff试剂与这些新生成的醛基特异性结合，使糖原存在的部位形成稳定的紫红色化合物，从而清楚地显示组织细胞内的糖类。

2、结果判读：多糖类、糖蛋白、糖脂、黏蛋白及基底膜等均呈鲜艳的紫红色，细胞核经苏木素复染后呈淡蓝色。

 

三、服务流程与技术路线

① 脱蜡至水：石蜡切片，二甲苯脱蜡→梯度乙醇水化至蒸馏水。冰冻切片，直接入蒸馏水。

② 过碘酸氧化：石蜡切片，过碘酸溶液处理5-10 min，室温不宜超过20℃。冰冻切片同石蜡切片。

③ Schiff染色：石蜡切片，Schiff氏液避光浸染10-20 min。冰冻切片同石蜡切片。

④ 流水冲洗：石蜡切片，流水冲洗5-10 min，充分去除残余染料。冰冻切片同石蜡切片。

⑤ 苏木精复染：石蜡切片，Harris/Harris或Mayer苏木素染核1-3 min。冰冻切片同石蜡切片。

⑥ 返蓝：石蜡切片，自来水冲洗返蓝10-15 min。冰冻切片同石蜡切片。

⑦ 脱水透明：石蜡切片，梯度乙醇脱水→二甲苯透明。冰冻切片同石蜡切片。

⑧ 封片：石蜡切片，中性树胶封固。冰冻切片同石蜡切片。

备注：Schiff氏液染色和流水冲洗阶段需全程避光，以防止无色品红提前显色导致背景加深。染色时间需根据组织类型、切片厚度进行灵活调整，具体时间以技术人员的镜检监控为准。

 

四、服务说明与样本要求

1、未包埋组织块：约1×1×0.5 cm，10%中性福尔马林固定12-24 h；固定液体积至少为标本的20倍；常温运输。

2、石蜡蜡块：蜡块完整（带塑料框最佳），常温运输和保存。

3、石蜡切片：厚度3-5 μm，常温干燥保存，常温运输。

4、冰冻切片：-20℃避光运输保存；新鲜组织须干冰运输；如需自发荧光，用锡箔纸包裹。

5、细胞爬片：4%多聚甲醛固定15 min，PBS覆盖，4℃运输和保存。

注意事项：① 样本离体后须在0.5h内放入固定液固定；② 切勿固定时间过长（不宜超过48 h）；③ 用于黏液研究的样本建议使用不含水的Carnoy固定液；④ Schiff试剂应低温避光保存，工作液需在2 h内用完。

 

五、交付内容

1、PAS染色成品玻片（石蜡/冰冻切片）

2、石蜡蜡块

3、高清数字图像或全切片扫描图像

4、完整实验报告（含所用试剂、方法步骤及结果判读）

5、实验完成后归还剩余样本

6、可选服务：病理学分析报告、PAS阳性区域面积定量分析、底膜形态测量等

服务周期：7-10个工作日。

 

六、应用领域

1、肾脏病理：显示肾小球基底膜（紫红色）、系膜基质，评估基底膜增厚与肾小球疾病。

2、糖原贮积疾病：评估肝细胞、心肌细胞内糖原累积程度，辅助诊断糖原累积病。

3、真菌感染：隐球菌及其他真菌壁因富含多糖被染成紫红色，辅助真菌感染诊断。

4、黏液与空泡鉴别：鉴别细胞内空泡成分：糖原及中性黏液呈阳性（红色），脂肪空泡为阴性。

5、肿瘤病理：识别含黏液分泌的腺癌（如胃、肺、肠道黏液腺癌），辅助肿瘤鉴别诊断。

6、血液病：白血病鉴别：原粒细胞（阴性）vs 原淋巴细胞（阳性）。

7、心血管：检测心肌细胞内的糖原累积，辅助诊断心肌病变。

8、此外，PAS还可在植物学中显示淀粉粒及纤维素染色，显示发育生物学中基底膜与特定结构的糖蛋白分布。

 

七、常见问题（FAQ）

Q1：PAS染色的本质是什么？常见的可变因素对染色有何影响？

A：PAS染色本质上是一个二阶段反应：①过碘酸氧化相邻羟基形成醛基；②Schiff试剂与醛基反应生成品红醛复合物。染色的成败受氧化反应速率、Schiff试剂活性以及pH等条件影响，必须严格控制操作流程。固定液中的游离醛基会与试剂反应导致背景加深，因此福尔马林固定的组织需充分水洗去除残留醛基，或改用Carnoy液固定。

Q2：为什么染色结果很淡或接近阴性（背景很浅，目标结构不着色）？

A：可能原因包括糖原含量过低（如饥饿模型动物肝脏）、前处理不当破坏了反应基团、氧化剂或Schiff试剂失效。解决方法包括：使用已知的高糖原含量阳性对照组织；按标准时间氧化，必要时可小幅延长氧化时间；确保Schiff试剂低温避光保存并在有效期内使用。

Q3：染色结果有很深的紫红色背景，干扰阅片怎么办？

A：背景过深可能原因：① Schiff试剂染色后流水冲洗不充分，残留染料导致弥散性背景染色；② 试剂使用环境温湿度过高导致氧化反应速率失衡；③ 实验器皿存在残余染料污染。解决方法：充分冲洗组织切片；保持实验器皿与操作环境的清洁；整批染色时确保染色缸、染色架分次装液，不混用；或对试剂按比例稀释。

Q4：染色结果不均匀怎么办？

A：染色结果不均匀可能源于组织前处理不一致所致，如局部固定不当、脱水透明不完全或包埋温度不当，造成染料区域透过性差异；切片厚度不均或组织表面干燥也可导致局部着色差异。解决方法：规范组织处理流程，确保切片厚度均一（推荐4-6 μm），并在染色过程中使染液完全覆盖切片表面。

Q5：氧化剂和Schiff试剂可以重复使用吗？

A：氧化剂（过碘酸）可重复使用，但当溶液变黄浑浊或着色效果明显减弱时须更换新鲜染液。Schiff试剂应现配现用，密封后存放时间过长会导致显色效果显著减弱甚至失效。

Q6：福尔马林固定是否会影响PAS染色？

A：福尔马林固定液本身含游离醛基，这些醛基残留会与Schiff试剂非特异性结合，导致背景假阳性。因此，福尔马林固定的组织切片在进行PAS染色前必须经过充分的流水洗涤，以彻底去除游离醛基；若需更低背景，建议改用不含醛基的Carnoy固定液。

Q7：石蜡切片和冰冻切片在PAS染色处理上有什么不同？

A：送样前，两种方法的组织处理流程不同。后者必须经二甲苯脱蜡和水化等预处理步骤以恢复组织水合状态与染料渗透性，因此前处理时间较长；而冰冻切片无需脱蜡，可直接水洗染色，步骤更简短。无论何种切片，氧化与Schiff反应步骤基本一致，可统一处理。

Q8：什么是糖原消化试验？为什么要做？

A：淀粉酶或麦芽糖酶预处理的平行切片称为糖原消化试验。该步骤用于验证PAS阳性结果是否真正来自糖原：淀粉酶/D-淀粉酶可选择性地水解糖原为小分子糖，再经PAS染色后特异性染色消失，可将其与同样PAS阳性的其他糖蛋白、黏蛋白或基底膜染色相区分。

  

  
                                        PAS染色                                                                  细胞爬片PAS染色                                                              植物PAS染色